
結合此前討論的豬葡萄球菌PCR檢測試劑盒操作、結果判定的相關背景,這類檢測的常見問題集中在結果偏差、操作環節、體系適配三大類,具體如下:
?假陽性結果?
多由樣本交叉污染、試劑被外源核酸污染、擴增產物殘留引發,也可能是引物設計不合理出現非特異性擴增,導致陰性樣本被誤判為陽性。
?假陰性結果?
常見原因包括樣本采集不到位、核酸提取失敗導致目標DNA丟失,試劑反復凍融后酶活性下降,PCR儀溫控不準、擴增程序設置錯誤,樣本中存在血紅蛋白等PCR抑制物干擾反應。
?結果重復性差?
不同批次檢測的同一樣本Ct值波動大,多是因為操作時加樣誤差大、試劑未充分混勻,或核酸提取效率不穩定導致。
?內參擴增異常?
內參無擴增信號,說明樣本核酸提取失敗,無法判定目標基因的真實情況,該批次樣本檢測結果全部無效。
?儀器適配問題?
部分非通用型號的熒光PCR儀,未提前校準熒光通道,會出現FAM通道信號采集不全,無法正常讀取擴增曲線的情況。
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