結合此前關于大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞表型維持、存活時長的相關背景，針對永生化細胞系RLE-6TN，可通過以下措施維持其表型特征：

?控制傳代代數(shù)?

嚴格限定在?10-20代?內使用，避免高代次細胞積累染色體突變，丟失SP-C等核心Ⅱ型肺泡上皮細胞標志物。

?優(yōu)化培養(yǎng)體系?

選用DMEM/F12基礎培養(yǎng)基，添加5%低濃度胎牛血清，搭配10nM，避免高血清誘導細胞向間質表型轉化。

?規(guī)范傳代操作?

細胞匯合度達80%-90%時傳代，消化時間控制在2-3分鐘，按1:2比例傳代，避免過度消化損傷細胞表型。

?添加表型維持因子?

培養(yǎng)基中加入10ng/mL角質細胞生長因子（KGF），特異性促進Ⅱ型肺泡上皮細胞功能維持，抑制其向AEC-Ⅰ轉分化。

?定期表型驗證?

每5代通過免疫熒光檢測SP-C表達，確認細胞未發(fā)生表型漂移，及時淘汰表型丟失的細胞批次。